ag尊龙凯时提供的人前列腺癌细胞VCAP培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM (含NaHCO₃ 15g/L) + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代，传代情况需每2天换液。

备注：使用无菌离心管收集瓶中培养基，留作对比培养，如对比效果不佳，建议直接使用我们的完全培养基。

二、细胞收货处理

收到细胞后，待细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口为最佳运输方式。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。观察细胞生长情况并拍照保存（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如未超过80%汇合度，收集瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO₂环境中继续培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，视显微镜下细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，移除上清液并用1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（如分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞以脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞并添加1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐中，请在-80℃冰箱保存至少24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能会出现一些贴壁不牢的情况而发生脱落，这属于正常现象。如有明显脱落，可将所有培养液收集至离心管中，离心后收集上清进行过渡培养。沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟，然后加5ml完全培养基终止反应，再次离心并重悬后按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

1) 可重发情况

1. 运输问题导致的细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液等情况可重发。
2. 收到产品后48小时内，如出现细胞污染问题，并提供真实实验结果，验证后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货后24小时内未存活，并提供真实的细胞状态照片，可重发。
4. 如干冰发货细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后开封出现污染可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，如在3天内未告知视为合格。若在4-7天内出现问题，需提供前三天照片及操作详细步骤，由技术人员判定责任后决定是否重发。

2) 不予重发情况

1. 客户造成的细胞污染，恕不重发。
2. 因客户不正确操作导致细胞状态不佳，恕不重发。
3. 采用非本库推荐的细胞培养体系导致状态不佳，恕不重发。
4. 未提供培养前3天照片而状态不佳，恕不重发。
5. 细胞培养时经过其他处理，恕不重发。
6. 收到细胞后2天内未告知，恕不重发。
7. 具体情况另行判断。

ag尊龙凯时致力于为您提供优质的细胞培养服务，请遵循上述操作规范以确保实验顺利进行。