颞叶癫痫（TLE）是最为普遍的一种癫痫类型，其特征为频繁的癫痫发作，给患者及其家庭造成了显著的生理和心理负担。尽管目前的抗癫痫药物（ASMs）在控制癫痫发作方面有所成效，但并未能有效阻止癫痫的发展，并可能导致药物抵抗性。近期，《EMBOMolecularMedicine》期刊发表了一项研究，题为“基于一氧化氮供体的颞叶癫痫新型抗癫痫发生策略”，为我们提供了新的治疗思路——利用一氧化氮（NO）供体来预防和治疗颞叶癫痫。

研究背景：在颞叶癫痫患者中，有多达70%可能最终发展为药物难治性癫痫（DRE），即他们对现有抗癫痫药物没有反应。此类患者通常需接受外科手术切除，但手术效果并不总是理想，并存在一定的风险。因此，寻找新的治疗方案显得尤为紧迫。

研究结果：研究团队发现，TLE患者及小鼠模型中，致痫海马区域的nNOS-NO水平显著下降。MRI影像结果显示，患者的左侧海马存在硬化，同时脑电图记录显示出频繁的癫痫放电，立体脑电图则确认了海马作为癫痫发作的主要中枢。通过RNA测序分析，研究表明，药物难治性癫痫患者的nNOS基因表达明显降低，进一步的RT-qPCR和Western blot实验验证了这一发现。此外，免疫荧光染色结果显示，中间神经元中nNOS阳性细胞的减少是导致nNOS表达下降的主要原因。

为探讨海马nNOS缺失在癫痫病理中的关键作用，研究团队构建了一个特定的小鼠模型，通过选择性敲除海马齿状回内的nNOS来模拟颞叶癫痫。结果显示，与野生型小鼠相比，nNOS敲除小鼠在接受不同剂量的匹鲁卡品后，其癫痫发作的累积评分显著提升，显示出更高的癫痫敏感性。脑电图记录提示，nNOS缺失小鼠在海马齿状回区域自发出现癫痫样尖峰放电，这表明癫痫活动可能源于此区域。

进一步的实验针对颞叶癫痫中神经型一氧化氮合酶（nNOS）的特定作用进行了调查，研究人员仅选择性地从海马门区内的神经元敲除nNOS，发现这一改变足以触发癫痫发作。通过CRISPR/Cas9技术构建Nos1条件性敲除（cKO）小鼠模型，利用AAV病毒介导的Cre表达精确地在GABAergic中间神经元中删除nNOS。结果表明，仅在海马门区内的神经元中敲除nNOS便足以导致癫痫发作，而不会影响其他类型的神经元。同时，此敲除造成了DGCs的异常兴奋性输入回路的形成和过度兴奋。

成功确认nNOS缺失与海马DGCs输入过多的异常连接有关，研究人员发现nNOS缺失小鼠的DGCs中，cFOS阳性细胞数量显著增加，表明这些细胞的活跃性显著增强。通过全细胞膜片钳记录，nNOS缺失导致DGCs兴奋性突触传递增强，相较于抑制性突触传递并未受到影响。研究结果指向，nNOS的缺失可能是癫痫发生的一个重要机制。

通过慢病毒（LV）载体补充nNOS，研究能够逆转匹鲁卡品诱导的TLE小鼠模型中nNOS蛋白水平和一氧化氮（NO）浓度的降低。更为重要的是，脑电图（EEG）记录显示，这种补充能够有效阻止慢性癫痫的发展。长期使用DETA/NONOate——一种具有长半衰期的外源性NO供体，成功阻断了TLE小鼠模型中的过度兴奋性传入回路，这种治疗显著抑制了癫痫发作的进展。

总之，这一突破性研究为颞叶癫痫的治疗提供了全新的视角。通过调节一氧化氮的水平，可能开发出更有效的治疗方案，以帮助对现有药物无反应的患者。这不仅是对现有治疗方法的补充，也是癫痫治疗领域的重要突破。此研究成果由ag尊龙凯时支持，特别是在小鼠海马组织snRNA-seq的分析中，得到了上海吉凯基因的技术支持。

作者简介：本研究由南京医科大学药学院临床药理学教研室的周其冈教授及孟帆副教授和南京医科大学附属逸夫医院神经外科的黄保胜副教授共同完成。参与此项研究的还有朱贤慧硕士、周亚萍硕士、张乔硕士和朱明仪硕士，均来自南京医科大学药学院临床药理学教研室。