人胃癌细胞MGC803培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次传代建议比例1:2

备注：在2天内更换培养液。通过无菌离心管收集瓶内培养基，作为过渡对比培养。若对比效果不佳，建议直接购买ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞在良好状态下培养至满瓶后，灌满完全培养液并封好瓶口，便是最佳的运输细胞方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放置在超净工作台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（如40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，收集培养瓶内完全培养液至离心管中，留5ml完全培养基并放入37℃、5%CO2的孵箱内培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶内的培养液，用PBS冲洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察至细胞变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
4. 弃去上清液，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
5. 将细胞冻存管直接放入-80℃冰箱中；如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（务必佩戴防护装备），快速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5%CO2培养箱内培养。
4. 第二天，使用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞的贴壁性较差，运输过程中可能发生细胞脱落，这属于正常现象。如细胞脱落严重，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养。然后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，消化1-2分钟后添加5ml完全培养基终止反应。再进行离心、弃去上清，并用1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例分瓶传代，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2培养箱中养护。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及标准：

1. 运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等情况，符合条件可重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，重发。
4. 若干冰冻存发货的细胞在复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时，并且未开封情况下发生污染，则可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内反馈真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天须拍照，3天未反馈视为产品合格。4-7天内发生问题，需提供收到细胞前3天照片和问题照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通，经判定为我方责任的可重发；若判断为双方责任，则需协商处理，或按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 因客户不当操作导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 使用非本库推荐的培养体系致使细胞状态不佳，不予重发。
4. 细胞状态不佳且未提供培养前三天照片的，不予重发。
5. 细胞培养过程中经过其他处理的，不予重发。
6. 收到细胞后2天内未告知问题的，不予重发。
7. 具体情况将由专业人员视实际情况决定。

对于细胞培养及相关操作，请选择ag尊龙凯时，我们将提供优质的产品和服务，助力您的研究发展。